在生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷及材料檢測(cè)領(lǐng)域，光學(xué)顯微鏡是觀察微觀世界的基礎(chǔ)工具。然而，其制樣過程涉及生物樣本處理、化學(xué)試劑使用及精密光學(xué)系統(tǒng)操作，潛在風(fēng)險(xiǎn)不容忽視。本文從個(gè)人防護(hù)、樣本制備、設(shè)備操作到環(huán)境管理，系統(tǒng)梳理光學(xué)顯微鏡制樣的安全事項(xiàng)，助力實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建規(guī)范化安全體系。
一、個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）：分層防御風(fēng)險(xiǎn)
1. 生物樣本處理防護(hù)
生物安全柜操作：處理病原微生物或活體樣本時(shí)，B須在BSC-II級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，避免氣溶膠泄漏。
防護(hù)服與手套：穿戴一次性無粉乳膠手套及實(shí)驗(yàn)服，處理高風(fēng)險(xiǎn)樣本（如結(jié)核桿菌）時(shí)升級(jí)至正壓防護(hù)服。
2. 化學(xué)試劑防護(hù)
防化眼鏡與面罩：使用甲醛、二甲苯等致癌試劑時(shí)，佩戴全封閉防化面罩，防止蒸汽吸入或液體飛濺。
通風(fēng)櫥使用：在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行染色、脫蠟等步驟，確保有害氣體排放濃度<0.5ppm。
3. 物理損傷防護(hù)
防切割手套：操作載玻片或蓋玻片時(shí)，佩戴耐切割等級(jí)3級(jí)的手套，避免手部被玻璃碎片劃傷。
激光安全護(hù)目鏡：若設(shè)備配備激光模塊（如共聚焦顯微鏡），需佩戴對(duì)應(yīng)波長的防護(hù)眼鏡。
二、樣本制備規(guī)范：從固定到封片的標(biāo)準(zhǔn)化流程
1. 生物樣本固定與染色
固定液選擇：
細(xì)胞樣本優(yōu)先使用交聯(lián)劑（如多聚甲醛），避免使用劇毒的汞類固定劑。
動(dòng)物組織樣本需在固定后充分清洗，殘留甲醛濃度<0.1%。
染色劑管理：
蘇木精-伊紅（H&E）染色劑需單獨(dú)存放，避免與酸性試劑混放引發(fā)爆炸風(fēng)險(xiǎn)。
2. 化學(xué)試劑配制與使用
濃度梯度控制：
梯度酒精脫水時(shí)，從70%逐步過渡至****，避免濃度突變導(dǎo)致樣本收縮破裂。
使用二甲苯透明化時(shí)，時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，防止樣本過度硬化。
廢棄物處理：
染色廢液需用專用容器收集，標(biāo)注“化學(xué)廢棄物”，交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處置。
3. 封片與存儲(chǔ)安全
中性樹膠使用：封片時(shí)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，避免吸入樹膠揮發(fā)物。
樣本存儲(chǔ)條件：
熒光樣本需避光保存于-20℃冰箱，防止熒光淬滅。
載玻片盒需標(biāo)注樣本類型、制備日期及操作人信息。
三、設(shè)備操作安全：從光源到機(jī)械部件的風(fēng)險(xiǎn)管控
1. 光源系統(tǒng)安全
汞燈防護(hù)：
開啟汞燈后需等待15分鐘穩(wěn)定期，避免頻繁開關(guān)縮短壽命。
更換汞燈時(shí)佩戴防紫外線手套，防止皮膚灼傷。
LED光源散熱：
連續(xù)使用LED光源>4小時(shí)時(shí)，確保設(shè)備散熱風(fēng)扇正常運(yùn)行，避免過熱保護(hù)停機(jī)。
2. 機(jī)械部件操作
載物臺(tái)移動(dòng)限制：
手動(dòng)調(diào)節(jié)載物臺(tái)時(shí)，避免粗暴操作導(dǎo)致物鏡碰撞樣本。
電動(dòng)載物臺(tái)需設(shè)置軟件限位，防止行程超限。
物鏡清潔與保養(yǎng)：
使用專用鏡頭紙清潔物鏡，避免用酒精直接擦拭鍍膜層。
長期不用的物鏡需存放在干燥皿中，防止霉變。
四、環(huán)境與應(yīng)急管理：構(gòu)建安全實(shí)驗(yàn)室生態(tài)
1. 工作區(qū)域規(guī)劃
分區(qū)管理：
設(shè)立“清潔區(qū)”（樣本制備）與“污染區(qū)”（染色、廢棄物處理），通過顏色標(biāo)識(shí)區(qū)分。
防滑與防爆設(shè)計(jì)：
地面鋪設(shè)防靜電地膠，化學(xué)試劑存放區(qū)安裝防爆柜。
2. 應(yīng)急物資配置
洗眼器與沖淋裝置：
在顯操作臺(tái)10秒步行距離內(nèi)配置洗眼器，并定期檢查水流壓力（≥1.5L/min）。
化學(xué)灼傷急救包：
包含中和劑（如5%碳酸氫鈉溶液）、無菌紗布及操作指南。
3. 事故應(yīng)急流程
化學(xué)試劑接觸皮膚：
立即用大量清水沖洗15分鐘，并涂抹對(duì)應(yīng)的燒傷膏。
生物樣本污染：
封鎖現(xiàn)場(chǎng)并啟動(dòng)紫外線消毒燈，通知生物安全專員處理。
五、維護(hù)與培訓(xùn)：安全文化的長效機(jī)制
1. 定期維護(hù)計(jì)劃
每日清潔：
用氣槍清除設(shè)備內(nèi)部粉塵，重點(diǎn)清理光源散熱孔及載物臺(tái)導(dǎo)軌。
年度深度保養(yǎng)：
拆解物鏡組，用異丙醇清洗內(nèi)部鏡片，并重新校準(zhǔn)光路。
2. 操作員認(rèn)證體系
理論考核：
涵蓋設(shè)備原理、安全規(guī)程、應(yīng)急處理等內(nèi)容，合格線設(shè)為95分。
實(shí)操評(píng)估：
在導(dǎo)師監(jiān)督下完成3種不同樣本（細(xì)胞涂片、組織切片、金屬顆粒）的制備，染色均勻度>90%。
六、實(shí)戰(zhàn)案例：安全漏洞的代價(jià)與改進(jìn)
案例1：汞燈爆炸事故
原因：未等汞燈冷卻強(qiáng)行拆卸，導(dǎo)致燈管炸裂。
改進(jìn)：
制定《汞燈操作SOP》，明確“冷卻30分鐘”強(qiáng)制等待時(shí)間。
加裝汞燈防護(hù)罩，緩沖爆炸沖擊波。
案例2：化學(xué)廢液誤混引發(fā)火災(zāi)
原因：將含乙醇的廢液與含次氯酸鈉的廢液混合，產(chǎn)生氯仿爆炸。
改進(jìn)：
實(shí)施“廢液分類投放”制度，設(shè)置紅（酸性）、藍(lán)（堿性）、黃（有機(jī)）三色廢液桶。
在廢液處理間安裝可燃?xì)怏w報(bào)警器。
結(jié)語：安全是顯微觀察的“隱形透鏡”
光學(xué)顯微鏡制樣的安全操作不僅關(guān)乎數(shù)據(jù)質(zhì)量，更直接影響人員健康與設(shè)備壽命。通過個(gè)人防護(hù)、樣本規(guī)范、設(shè)備管控、環(huán)境管理四維防控，可系統(tǒng)性降低風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于實(shí)驗(yàn)室管理者而言，定期開展安全培訓(xùn)、更新防護(hù)裝備、優(yōu)化操作流程，是構(gòu)建安全文化的核心路徑。記住：每一次規(guī)范操作，都是對(duì)科研效率與實(shí)驗(yàn)室安全的雙重保障。
